高效氯氟氰菊酯和阿维菌素对中华蜜蜂CarE和GSTs的影响

学习、行为和生理会产生明显的亚致死效應[17]。迄今为止，亚致死剂量的高效氯氟氰菊酯和阿维菌素对中华蜜蜂解毒酶的影响尚未见报道，因此本研究在实验室条件下测定高效氯氟氰菊酯和阿维菌素对CarE和GSTs的剂量效应和时间效应，以期为诊断杀虫剂对蜂群健康的影响及更好地保护中华蜜蜂提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试虫源 中华蜜蜂采集蜂，由中国热带农业科学院环境与植物保护研究所试验蜂场提供（N19°32′，E109°32′）。供试蜜蜂要求同一种群、龄期相同、健康状况良好。

1.1.2 仪器与试剂 试验仪器：紫外可见分光光度计（SHIMADZU CORPORATION，UV-2600），数显三用恒温水箱（金坛市金南仪器厂，XMTD-204），漩涡混合器（Labnet，VX100），小型台式冷冻型离心机（Eppendorf，5417R），电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司，TLE204E/02），微量移液枪（SWISS，SOCOREX）及配套吸头，温湿度记录仪（浙江托普仪器有限公司，TPJ-20），超纯水系统（Cascada LS，PAL-CAXXXLSM2）。

供试药剂及试剂：93.5%阿维菌素原药（山东志诚化工有限公司）、97%高效氯氟氰菊酯原药（农业部农药检定所）、考马斯亮蓝G-250（Solarbio公司）、牛血清白蛋白（BSA，Solarbio公司）、十二烷基硫酸钠（SDS，Sigma公司）、α-乙酸萘酯（α-NA，Solarbio公司）、β-乙酸萘酯（β-NA，Solarbio公司）、毒扁豆碱（上海源叶生物科技有限公司）、固蓝B盐（Solarbio公司）、α-萘酚（Macklin 公司）、β-萘酚（Macklin 公司）、谷胱甘肽（GSH，Solarbio公司）、乙二胺四乙酸（EDTA，Biotopped公司）、1，1-二氯-2，4-二硝基苯（CDNB，Sigma公司），95%乙醇（分析纯，西陇化工股份有限公司）、磷酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）、磷酸氢二钠（分析纯，广州化学试剂厂）、磷酸二氢钾（分析纯，西陇化工股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 生物处理 毒力测定：参照国家环境保护部颁布的《化学农药环境安全评价试验准则》，稍加改进。采用摄入法测定经口毒性。用50%蔗糖水将药剂稀释成系列试验浓度，装入15 mL直口离心管中，直至将离心管中事先放入的0.2～0.25 g脱脂棉润湿即可；通过饲喂孔放入贮蜂笼内，让饥饿2 h的中华蜜蜂通过孔眼取食，并且在试验期间保持脱脂棉湿润，用50%蔗糖溶液作为对照组。试验共设6个处理，每处理3次重复，每重复10只蜜蜂，48 h后检查死亡虫数。

剂量效应：根据毒力测定结果，分别选取高效氯氟氰菊酯和阿维菌素对蜜蜂的亚致死浓度LC5、LC10、LC20、LC30、LC40，用摄入法处理中华蜜蜂，同时以无药剂的50%蔗糖溶液作为对照组。试验每药剂共设6个处理，每处理3次重复，每重复10只蜜蜂。取食24 h后将存活蜜蜂放入-20 ℃冰箱使其麻痹，然后取出中肠用于CarE和GSTs的活性测定。

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